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1.制备细胞悬液：

关于悬液培养的细胞，可直接进行下面的过程2（计数与核算进程）。假设计数目标为贴壁生长的细胞，首要需将培养物按如下过程制备成细胞悬液。

①停止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。

②给培养瓶内参加1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下调查。当细胞变圆挨近脱壁时，弃消化液。

③参加一定量的培养液（假设这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。

2.计数与核算进程

①在细胞计数板中心放置计数的盖玻片。

②用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满停止。

③置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。关于压线的细胞只计数在上线和左线者，关于细胞团按单个细胞计数。

④按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml 。

二、注意事项：

①必须使松散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。

②显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞核算。假设细胞团>10％，阐明细胞松散不充分。