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beat365·体育官网人脑静脉血管内皮细胞培养方法保存应用及安全性

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培养工作中，主要从以下几个方面来预防细胞支原体的污染：

A. 控制环境污染

B.严格实验操作

C.细胞培养基和器材要保证无菌

D.在细胞培养基中加入适量的抗生素

E.避免细胞污染，可以从预防着手，超净工作台物品放置要合理、进入细胞房要换鞋和穿实验服、实验员戴手套后要用酒精等消毒、避免细胞交叉污染等等培养准备和安装过滤器：清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。

保存应用及安全性：

保存应用：新鲜细胞，请于收到后放入二氧化碳培养箱内静置2-3小时后再进行实验操作；如是冻存细胞，收到后可放入液氮或-80C冰箱

保存也可进行复苏操作。

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞

的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下（是在4X物镜）观察整个细胞生长情况。

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细胞复苏步骤：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

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E.产品储存：收到产品后需放置在阴凉处或冷藏，切记放置在高温处

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