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beat365·体育官网小鼠5羟色胺4(5-HT4)elisa试剂盒操作事项介绍如下

标本要求：

1、血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2、血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

3、尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉定形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4、细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5、培养细胞：

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分》。仔细收集上清。保存过程中如有沉定形成，应再次离心。

6、组织标本:

切割标本后，称取重里。加入一定里的PBS，PH7.4。用液氛迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定里的PBS（PH7.4)，或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

7、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于一20℃保存，但应避免反复冻融

8、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，依次进行稀释数倍。

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50H1，待测样品孔中先加样品稀释液40日1，然后再加待测样品10日1（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽里不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50比1，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

10、显色：每孔先加入显色剂A50H1，再加入显色剂B50H1，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟

11、终止：每孔加终止液50H1，终止反应（此时蓝色立转黄色》。

12、测定：以空白空调零，450m波长依序测量各孔的吸光度（0D值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作事项：

1、小鼠5羟色胺4（5一HT4）elisa试剂盒准备：所有试剂都必须在使用达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2、加样：加样或加试齐，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，个孔与后一个孔加样之间时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测里值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）好控制在10分钟内，如标本数里多，推荐使用多道移液器加样。

3、孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态：同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4、洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。

5、试齐酒制：DetectionA及DetectionB在使用请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的里配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽里不要微里配置（如吸取检测溶液时，一次不要小于10日1），以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7、底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

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